¿Necesito crear otra conexión en la nube si las instancias de red en una región necesitan comunicarse con las instancias de red en otras dos regiones que ya se han cargado en una conexión en la nube?

No.

Cargue las instancias de red de la primera región a la conexión en la nube utilizada por las instancias de red de las otras dos regiones y asigne el ancho de banda entre regiones entre cada par de regiones.

De esta manera, las instancias de red en las tres regiones pueden comunicarse entre sí.